超声波辅助提取海蜇胶原蛋白的最佳工艺

被誉为“海产八珍”之一的海蜇（Rhopulema esculentum Kishinouye）属于暖水性水母类，为白色、青色或微黄色，具有药食两用的功效，有很高的经济价值和药用价值。海蜇蛋白质占总干重质量的50％，其中胶原蛋白含量最高。胶原蛋白主要来源于陆生动物，但由于这类胶原蛋白可能会引起人畜共患病，研究人员将目光转向水产类胶原蛋白。当前市场上已涌现出多种以鱼肉和鱼皮为原料的胶原蛋白产品 。胶原蛋白的提取方法主要分为酸法提取、酶法提取、碱法提取、热水提取、盐溶液提取。酸法提取容易破坏蛋白质结构，碱法提取会使蛋白质发生消旋现象 。其他提取胶原蛋白的方法会导致胶原组织分解不彻底，胶原蛋白得率较低。超声波是一种频率介于20khz~100MHz之间的机械波，低强度的超声波作为一种安全高效的物理辅助方式，可以引起溶液的机械振动，使溶剂更好地进入物质内部，引发串联式作用，促进反应快速发生。采用低强度超声波辅助提取大豆蛋白，蛋白得率优于碱溶酸沉法。发现超声处理可促进蛋白溶解，在蛋白乳化中也可发挥作用。本研究采用低强度超声波和酶法辅助提取海蜇胶原蛋白，以期提高海蜇胶原蛋白得率，并对所得海蜇胶原蛋白组成进行分析，为海蜇的深加工提供了理论基础，拓宽了水产胶原蛋白的应用范围。

材料与方法 

材料与试剂 

海蜇皮 （食用级）：某水产市场；乙酸（36％，分析纯）、羟脯氨酸试剂盒：上海阿拉丁生化科技股份有限公 司；胃蛋白酶（≥3000U/mg）：上海麦克林生化科技股份有限公司；透析袋：上海源叶生物科技有限公司。 

仪器与设备

Scientz-IID超声波细胞粉碎机 宁波新芝生物科技股份有限公司；FreeZone 2.5L真空冷冻干燥机 美国Labconco公司；UV-2550紫外可见分光光度计岛津仪器（苏州）有限公司；L-8900全自动氨基酸分析仪日立高新技术有限公司；8H-3数显磁力加热搅拌器 锦州药业（集 团）器化玻有限公司；Scimitar2000傅里叶变换红外光谱仪 美国安捷伦公司；MS105DU电子分析天平梅特勒－托利多仪器（上海）有限公司；ThermoX1R 高速冷冻离心机 美国 Thermo Fisher Scientific公司。 

实验方法 

海蜇皮前处理将盐渍海蜇皮用自来水反复冲洗，冲洗后的海蜇皮浸泡在超纯水中12h，每3h换一次水，将超纯水浸泡后的海蜇皮沥干水分，放入密封袋中置于4℃冰箱中备用。将脱盐处理后的海蜇皮放入0.1mol/LNaOH溶液中，用磁力搅拌器缓慢搅拌3d，搅拌过程中每8h更换一次氢氧化钠溶液，之后将海蜇皮捞出，用蒸馏水反复清洗至中性，切分成2cmx2cmx0.5cm大小方块后沥干备用。

将上述处理后的海蜇皮浸泡在0.5mol/L乙酸溶液中，料液比为1:1，加入一定量胃蛋白酶进行消解后离心，以10000r/min离心20min（4℃），随后将上清液装入透析袋中，于0.2mol/LNaHPO4溶液中进行透析，透析液的量为透析袋内溶液体积的15~20倍，透析过程中每6h更换一次透析液，透析3d后 以10000r/min 离心，弃上清液，将沉淀复溶于0.5mol/L乙酸溶液中，冻干后于-80℃冰箱中保存